AZD5363有效抑制Akt(Akt1/Akt2/3) 的所有亚型，IC50为3 nM/8 nM/8 nM,对P70S6K/PKA也具有相似的抑制效果，对ROCK1/2具有较低的抑制活性。

靶点

体外研究

AZD5363是有效的Akt抑制剂，抑制Akt1, Akt2 和 Akt3时，IC50分别为3 nM, 8 nM 和8 nM。PIK3CA突变的激活，肿瘤抑制基因PTEN的丢失或失活，或HER2的扩增，都与AZD5363有着显著的关系。此外，还可以看出细胞系的RAS突变状态与抗AZD5363之间的相关性。AZD5363在细胞中抑制AKT底物的磷酸化，效价约为0.3〜0.8μM。AZD5363抑制182种实体和血液肿瘤细胞系中的41种细胞增殖，效价为< 3 μM

体内研究

AZD5363按100, 300 mg/kg剂量口服给药裸鼠，降低BT474c移植瘤中PRAS40, GSK3β,和 S6的磷酸化，这种作用具有剂量和时间依赖性，也可逆性地增加血糖浓度，且降低U87-MG移植瘤中2[18F]氟-2-脱氧-d-葡萄糖(18F-FDG)的摄取，这种作用存在剂量依赖性。AZD5363按130, 200, 和300 mg/kg剂量慢性口服给药从各种肿瘤类型衍生的移植瘤，包括抗Trastuzumab的HER2+乳腺癌模型，抑制移植瘤的生长，这种作用存在剂量依赖性。AZD5363在乳腺癌移植瘤中也显著增强 Docetaxel, Lapatinib, 和 Trastuzumab的抗肿瘤活性。

Ipatasertib(GDC0068)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.3314 mL

11.6572 mL

23.3144 mL

5 mM

0.4663 mL

2.3314 mL

4.6629 mL

10 mM

0.2331 mL

1.1657 mL

2.3314 mL

50 mM

0.0466 mL

0.2331 mL

0.4663 mL

Caliper Off-Chip Incubation迁移率变动分析:
通过 Caliper Off-Chip Incubation迁移率变动分析测评AZD5363和其他化合物抑制AKT1, AKT2, 和 AKT3活性的能力。活跃的重组AKT1，AKT2，或AKT3与5-FAM标记的定制合成的肽底物，及浓度不断增加的抑制剂温育。最终反应包含1 到 3 nM AKT1, AKT2, 或AKT3 酶; 1.5 mM 肽底物; AKT亚型的ATP为Km; 10 mM MgCl2, 4 mM DTT, 100 mM HEPES, 及0.015% Brij-35。反应在室温下温育1小时，然后加入含100 mM HEPES, 0.015% Brij-35 溶液, 0.1% 涂层试剂， 40 mM EDTA, 和5% DMSO的buffer终止反应。使用Caliper LC3000分析实验板，进行肽底物的分离，对磷酸化的产物进行电泳和激光诱导荧光的检测和量化。

细胞实验： 

Cell lines: 182种实体和血液肿瘤细胞系

• Concentrations: 0.003 μM-30 μM
• Incubation Time: 72 小时
• Method: 通过MTS和Sytox Green2种方法测定细胞增殖实验。细胞接种在96孔板中，在37°C下,含 5% CO2的环境中温育过夜。使用浓度为30 到 0.003μM的 AZD5363处理细胞72小时。对于MTS端点，通过CellTiter AQueous非放射性细胞增殖检测试剂测量细胞增殖。对于Sytox Green 端点，在TBS-EDTA buffer 中稀释的Sytox Green核酸染料加到细胞中（终浓度为0.13μM），使用Acumen Explorer测定死亡细胞数。通过加入Saponin（终浓度0.03％，在TBS-EDTA buffer中稀释）使细胞具有渗透性，温育过夜，并测量总细胞数。MTS 和Sytox Green 端点都是给药前测量，使用吸光度读数（MTS）或活细胞计数测定将实验组细胞的生长降低到未处理组细胞的一半所需要的浓度值。

动物实验：

Animal Models: 携带 BT474c, U87MG, KPL-4, HCC-1187 移植瘤的雌性裸鼠和雄性SCID小鼠

• Formulation: 溶于 10% DMSO 25% w/v Kleptose HPB
• Dosages: 130 mg/Kg-300 mg/Kg
• Administration: 口服处理 

AZD5438是一种有效的CDK1/2/9抑制剂，无细胞试验中IC50为16 nM/6 nM/20 nM。对CDK5/6作用效果稍弱，对GSK3β也有抑制作用。

特性

一种周期蛋白依赖性激酶(CDK) 1，2，和9的有效抑制剂。

靶点

体外研究

AZD5438对细胞周期素依赖性激酶，包括细胞周期素E-cdk2，细胞周期素A-cdk2，细胞周期素B1-cdk1，细胞周期素D3-cdk6，和细胞周期素T-cdk9的活性表现出有效的抑制作用，IC50分别为6 nM，45 nM，16 nM，21 nM，和20 nM。此外，AZD5438也会抑制p25-cdk5和糖原合成激酶3β的激酶活性，IC50分别为14 nM 和17 nM。 AZD5438通过抑制cdk-依赖性底物的磷酸化作用诱导细胞周期阻滞，并对一系列肿瘤细胞系，包括肺，结肠直肠，乳腺，前列腺，和血液肿瘤表现出广泛的抗增殖活性，IC50范围为0.2 μM (MCF-7) 到1.7 μM (ARH-77)。

体内研究

在体内，AZD5438口服治疗对衍生自各种不同类型的癌症，包括乳腺癌，结肠癌，肺癌，前列腺癌和卵巢癌的人体肿瘤异种移植物的生长产生统计学显著的抑制作用，最大TGI范围为38% 到153%。在SW620异种移植物模型中，AZD5438会对各种细胞周期蛋白，比如phH3，磷酸核仁素，PP1a，和几种磷酸- pRb多肽产生剂量依赖性抑制作用。

BMS-265246

MB4023

BS-181 HCl

MB4001

Dinaciclib (SCH727965)

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.6921 mL

13.4604 mL

26.9208 mL

5 mM

0.5384 mL

2.6921 mL

5.3842 mL

10 mM

0.2692 mL

1.3460 mL

2.6921 mL

50 mM

0.0538 mL

0.2692 mL

0.5384 mL

重组激酶试验:
AZD5438抑制cdk活性的能力通过闪烁迫近分析法检测，使用重组cdk-细胞周期素复合物细胞周期素-Ecdk2，cdk2-细胞周期素A，cdk4-细胞周期素D，和重组视网膜母细胞瘤底物(氨基酸792-928)或cdk1-细胞周期素B1，以及衍生自体外组蛋白H1(biotin-X-Pro-Lys-Thr-Pro-Lys-Lys-Ala-Lys-Lys-Leu)p34cdc2磷酸化位点的多肽底物进行。AZD5438对重组cdk5/p25 (2 μM ATP)的活性基于闪烁迫近分析法试验使用多肽底物(AKKPKTPKKAKKLOH)进行测定。糖原合成酶激酶3β活性的抑制通过闪烁迫近分析法使用纯化的人糖原合成酶激酶3β酶和真核起始因子2B底物(1 μM ATP)进行测定。AZD5438对活性重组人cdk6-细胞周期素D3, cdk7-细胞周期H/MAT1 (cdk 活化激酶复合物)，和cdk9-cyclin T的作用使用激酶选择性筛选技术进行筛选。

细胞实验

Cell lines: MCF-7，HCT-116，A549，和IM-9

• Concentrations: 0 到10 μM
• Incubation Time: 48 小时或 72 小时
• Method: 测试AZD5438对实体肿瘤细胞系的作用。简而言之，细胞与一系列浓度的AZD5438培养48小时。在培养结束时，细胞用5-溴-2′-脱氧尿苷 (BrdUrd)脉冲，测量DNA合成的量。抑制增殖的IC50独立于细胞死亡特异性测定。多重骨髓瘤细胞系接种到96孔板的RPMI 1640中，用10% FCS和谷氨酸盐进行增补，并给药AZD5438，培养72小时。细胞生长使用AlamarBlue测量，GI50值根据预处理对照值进行计算。

动物实验

• Animal Models: 皮下注射MCF-7，HCT-116，A549，和 IM-9 细胞的 Swiss 无毛小鼠和无毛大鼠。
• Formulation: AZD5438在羟丙基甲基纤维素中溶解。
• Dosages: ≤100 mg/kg
• Administration: 口服给药