AZD6482是PI3Kβ抑制剂，IC50为10 nM,作用于PI3Kβ比作用于PI3Kδ, PI3Kα 和PI3Kγ选择性分别高8,86，和109倍。

靶点

PI3Kβ

PI3Kα

PI3Kγ

PI3Kδ

IC50

21 nM

1.4 μM

1.2 μM

80 nM

体外研究

AZD6482是PI3Kβ抑制剂，IC50为21 nM, 然而, AZD6482也抑制PI3Kα,γ,和δ, IC50为80 nM到1.4 μM, 明显比其(+)-对印异构体(S型)低很多。AZD6482是抗血小板药，在洗涤血小板聚集(WPA)实验中，抑制活化血小板粘附/聚集，且促进血小板解聚，IC50为6 nM。而且, AZD6482靶向作用于PI3Kβ，特定抑制血栓形成而不影响正常止血。因此, AZD6482作为抗血栓药，用于预防血栓疾病。

特征

AZD6482是PI3Kβ抑制剂，作为抗血小板和抗血栓的药剂。

GSK2636771

MB5532

BYL719

MB3886

GDC-0032

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4483 mL

12.2414 mL

24.4828 mL

5 mM

0.4897 mL

2.4483 mL

4.8966 mL

10 mM

0.2448 mL

1.2241 mL

2.4483 mL

50 mM

0.0490 mL

0.2448 mL

0.4897 mL

抑制PI3K酶实验 :
通过AlphaScreen酶活性测定使用人重组酶测定对PI3Kβ, PI3Kα, PI3Kγ和 PI3Kδ的抑制效果。该法测量PI3K调节的PIP2和PIP3之间的转换。生物素化的PIP3，即GST-标记的血小板-白细胞C 激酶底物同源(PH) 域和两个AlphaScreen 磁珠形成复合体，在680 nm处形成激光信号。在酶反应复合体中形成的PIP3与生物素化的 PIP3竞争性地结合到PH 域，引起提高酶产物，降低信号。AZD6482 溶于DMSO，加到385孔板上。PBKβ, PBKα, PBKγ, 或PBKδ加到 Tris buffer(50 mM Tris pH 7.6, 0.05% CHAPS, 5 mM DTT, 和24 mM MgCl2) 中，和AZD6482 预温育20分钟，然后加入含 PIP2和ATP的底物溶液。20分钟后，加入含EDTA 和生物素-PIP3的终止液，而终止酶反应,随后加入含GST-grpl PH 和AlphaScreen磁珠的检测液。实验板在暗中放置最少5小时，然后用于实验分析。实验中DMSO, ATP和 PIP2 的最终浓度分别为0.8%, 4 μM, 和40 μM。计算IC50值。

细胞实验：

• Cell lines: 人血小板颗粒
• Concentrations: 0-60 nM, 溶于 DMSO
• Incubation Time: 5分钟
• Method: 在洗涤血小板聚集 (WPA)实验中,从人血液中分离血小板颗粒，再悬浮在含1 μM水蛭素和0.02 U/mL三磷酸腺苷双磷酸酶的2×1015/L Tyrodes buffer 中。然后，血小板悬浮液在室温下搁置30分钟。实验开始前，加入CaCl2，终浓度为2 mM。AZD6482, 溶于DMSO,加到96孔板中，然后 加入洗涤的血小板悬液。血小板悬液和 AZD6482预温育5分钟。在650 nm处记录吸光值，然后震荡板5分钟再记录吸光值，记为R0和Rl。每孔加入特定浓度的小鼠 抗人CD9抗体 ，震荡板10分钟，记录吸光值，记为R2。用于数据分析, 除去所有数据中和TB结合而测定的吸光值，然后根据公式: [(R1-R2)/R1]×100 计算聚集百分数。另外，根据同样公式 [(R0-Rl)/R0]×100 评定抑制剂的自发聚集效果。然后测定IC50值。

AZD6738是一种口服具有活性的，选择性ATR 激酶抑制剂，IC50 为 1 nM。

靶点

ATR

IC50

1 nM

体外研究

在四个Kras突变细胞系：H23，H460，A549，和H358中，AZD6738抑制ATR激酶活性，并损害细胞活性。在ATM缺失的H23细胞中，AZD6738强烈增强顺铂诱导快速细胞死亡的作用。在p53 或 ATM缺失的细胞中，AZD6738治疗引起复制叉停滞和未修复DNA损伤的积累，导致有丝分裂障碍，从而使细胞死亡。

体内研究

在负荷H460和H23肿瘤的裸鼠中，AZD6738 (50 mg/kg, p.o.)导致肿瘤生长抑制(TGI)，结合顺铂引起ATM缺失的H23肿瘤快速退化。在负荷LoVo异种移植物的裸鼠中，AZD6738 (50 mg/kg) + IR (2 Gy)的组合避免了毒性，同时仍保持疗效。

AZ20

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.4242 mL

12.1209 mL

24.2418 mL

5 mM

0.4848 mL

2.4242 mL

4.8484 mL

10 mM

0.2424 mL

1.2121 mL

2.4242 mL

50 mM

0.0485 mL

0.2424 mL

0.4848 mL

Cell lines: H23，H460，A549，和 H358 细胞

• Concentrations: ~30 μM
• Incubation Time: 48小时
• Method: 细胞在白色壁，透明底的96孔板中与指示剂量的AZD6738，cisplatin，gemcitabine，或它们的组合处理48小时。ATP水平通过CellTiter-Glo发光细胞活性试验和Safire2酶标仪测量代替品活性评估。进一步分析之前，原始数据对本底发光进行校正。对于AZD6738治疗，在GraphPad Prism 6中将对数转化(x=log(x))的数据归一化为未处理对照组的平均值，通过非线性回归(log(抑制剂) vs. 对可变斜率的响应值) 生成对数剂量响应曲线。GI50值，定义为Y = 50%时，X的剂量，根据剂量反应曲线推导得出。

动物实验： 

Animal Models: 负荷 H23 或 H460 异种移植物的雌性无胸腺裸鼠

• Formulation: 10% DMSO，40% 丙二醇，和 50% 无菌 dH2O
• Dosages: 25 或 50 mg/kg
• Administration: p.o.

AZD7762是有效的，选择性Chk1抑制剂，IC50为5 nM，也同等有效作用于Chk2，对CAM, Yes, Fyn, Lyn, Hck 和 Lck作用效果稍弱。

靶点

CHK1

CHK2

IC50

5 nM

<10 nM

体外研究

AZD7762是Chk1选择性抑制剂, 通过与Chk1的ATP结合位点可逆结合而抑制cdc25C肽段的Chk1磷酸化，IC50 为5 nM，Ki为 3.6 nM。AZD7762诱导细胞周期停滞，EC50为0.620 μM, 且通过阻断cdc25A依赖chk1的降解 和Cyclin A的激活，显著废除Camptothecin诱导的G2期停滞，EC50为10 nM。300 nM AZD7762增强Gemcitabine作用于SW620的抗癌活性，也增强 Topotecan作用于MDA-MB-231 的抗癌活性，通过降低 GI50 值，分别从24.1 nM和2.25 μM 降到1.08 nM 和0.15 μM。AZD7762 作用于多种携带p53野生型，p53突变型，MDM2增添，或p14缺失的神经母细胞瘤细胞系，IC50为82.6 nM 到505.9 nM。

体内研究

AZD7762 按25 mg/kg剂量单独作用于携带H460-DNp53移植瘤的小鼠和携带SW620移植瘤的小鼠，显示很弱的抗癌活性,但是和Gemcitabine(60 mg/kg)联用处理这两种携带移植瘤的小鼠，则具有强抗癌活性。AZD7762和Gemcitabine(10 mg/kg) 联用作用于携带H460-DNp53移植瘤大鼠，抑制肿瘤体积，这种作用存在剂量依赖性。AZD7762 (25 mg/kg)和Irinotecan (25或50 mg/kg) 联用作用于携带SW620移植瘤的小鼠，引起全部肿瘤衰退

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.7592 mL

13.7961 mL

27.5923 mL

5 mM

0.5518 mL

2.7592 mL

5.5185 mL

10 mM

0.2759 mL

1.3796 mL

2.7592 mL

50 mM

0.0552 mL

0.2759 mL

0.5518 mL

Chk1激酶实验:
使用杆状病毒载体，融合在昆虫细胞中，重组人类Chk1表达作为谷胱甘肽S转移酶，通过胱甘肽亲和层析纯化。合成的肽底物 (N-biotinylaminohexanoyl-KKVSRSGLYRSPMPENLNRPR)用于Chk1 合成。实验中，肽和ATP(完全和40 nCi [33P]ATP) 的终浓度分别为0.8和1 μM。不同浓度AZD7762, 含肽和chk1激酶和ATP的buffer相继加到384孔板中。然后温育2小时,加入含EDTA和邻近闪烁分析(SPA)圆球微粒的buffer终止反应, 然后使用TopCount计数器读数。进行数据分析，测定IC50值。

细胞实验

• Cell lines: HT29,SW620和MDA-MB-231细胞
• Concentrations: 溶于DMSO, 终浓度为12.5 μM 左右
• Incubation Time: 20或48小时
• Method: 检测点废除实验中, 用Camptothecin(拓扑异构酶I 抑制剂;0.07 μg/mL)处理HT29细胞2小时，诱导产生G2期检测点。然后用AZD7762(12.5 μM 到6 nM)12点滴定法和Nocodazole处理细胞20分钟。细胞和3.7%甲醛混合1小时，用含0.05% Triton X的PBS渗透处理, 然后与anti-phH3抗体温育1小时，然后用Hoechst染料染色1小时。使用ArrayScan测定有丝分裂指数，作为进行有丝分裂细胞的百分数。增强实验中,用Gemcitabine 9点滴定（0.01到 100 nM）和固定剂量AZD7762(300 nM)处理SW620或MDA-MB-231细胞24小时。24小时后, 移除培养基，单独加入AZD7762，再处理24小时。细胞在无AZD7762培养基中再温育72小时，通过MTT测定细胞增殖。

动物实验

• Animal Models: 皮下注射H460-DNp53细胞或SW620细胞的雄性NCr小鼠, 或皮下注射H460-DNp53细胞的雄性rnu大鼠
• Formulation: 11.3% 2-羟丙基-β-环糊精
• Dosages: ~25 mg/kg
• Administration: 静脉注射

AZD8055 是新型的，ATP竞争性的mTOR抑制剂，IC50为0.8 nM，作用于PI3K亚型和ATM/DNA-PK，具有优异的选择性（约1000倍）。

靶点

全长mTOR

截短的mTOR

IC50

0.8 nM

0.13 nM

体外研究

AZD8055作用于所有 PI3K亚型 (α, β, γ, δ) 和其他近PI3K激酶家族(ATM和DNA-PK)显示出低活性。AZD8055抑制mTORC1(p70S6K 和4E-BP1) ，mTORC2 (AKT) 和下游蛋白的磷酸化。AZD8055完全抑制4E-BP1抗Rapamycin 的T37/46 磷酸化位点, 导致明显抑制cap-dependent 转译作用。AZD8055有效抑制U87MG, A549和H838 细胞增殖， IC50分别为53, 50，和20 nM。AZD8055作用于H838和A549细胞，也诱导自体吞噬和增加LC3-II 水平。AZD8055降低白血病细胞增殖和细胞周期进展, 降低白血病祖细胞的无性系生长，且在白血病细胞中诱导caspase依赖的细胞凋亡，但是作用于正常未成熟的CD34+ 细胞时不会产生这种诱导作用。AZD8055 抑制儿科临床前期测试计划(PPTP)细胞系，IC50 为24.7 nM，且在EFS 分布时诱导产生明显区别。

体内研究

AZD8055 按2.5/10 mg/kg剂量作用于U87MG和A549移植瘤抑制pS6和pAKT，导致肿瘤生长受抑制。AZD8055按10/20 mg/kg剂量处理多种移植瘤包括U87MG, BT474c, A549, Calu-3, LoVo, SW620, PC3和MES-SA时，显示出明显的抗癌活性。AZD8055诱导肿瘤体积下降约40%, 伴随着AKT, S6K，和SGK蛋白激酶磷酸化的切除。用AZD8055 (5mg/kg, 每天2次) 和SAHA (100 mg/kg/每天)处理PTEN+/−LKB1+/hypo 移植瘤，导致肿瘤生长全部受抑制，且对鼠mTORC1和mTORC2信号抑制没有副作用。

特征

AZD8055是第一种抑制两种类型mTOR蛋白的药物，被认为可能比之前mTOR抑制剂更有效。

Temsirolimus;CCI-779;NSC 683864

MB3476

Torin 2

MB4502

XL-388

1 mg

5 mg

10 mg

1 mM

2.1480 mL

10.7402 mL

21.4804 mL

5 mM

0.4296 mL

2.1480 mL

4.2961 mL

10 mM

0.2148 mL

1.0740 mL

2.1480 mL

50 mM

0.0430 mL

0.2148 mL

0.4296 mL

抑制mTOR的细胞为基础的测定实验:
通过高通量筛选细胞检测法，使用MDA-MB-468细胞，测定mTORC1 和mTORC2活性。用增加浓度的AZD8055处理细胞2小时。温育到最后时，细胞进行固定，冲洗，用p-Akt（S473）抗体和p-S6（S235/236)抗体探测。用激光扫描仪检测磷酸化水平。

细胞实验

• Cell lines: U87MG, A549，和H838 细胞
• Concentrations: 溶解在DMSO中，作为10 mM 储备液, 0.001-1.0 μM
• Incubation Time: 72到96小时
• Method: 用AZD8055处理细胞72到96小时， 用0.03 mg/mL Hoechst 33342染色细胞核，用1 μg/mL 吖啶橙染色酸性小囊泡染色。通过ArrayScan II平台在450和536纳米处获得图像，测量酸性小囊泡的百分数和细胞数量。进行LC3测评，用10 μg/mL e64d/抑肽素处理细胞30 到90分钟，然后和AZD8055温育。细胞溶解在冰上，通过免疫印迹法分析。

动物实验

• Animal Models: U87MG, BT474c, A549, Calu-3, LoVo, SW620, PC3 and MES-SA U87-MG和A549细胞建立在无病原体，雌性裸鼠体内(nu/nu:Alpk)。
• Formulation: 溶解在captisol中 (CyDex, pH 3.0)，稀释到最终captisol浓度为30% (w/v)。
• Dosages: 2.5-20 mg/kg
• Administration: 口服饲喂，每天1到2次。

457.47

化学式

C24H25F2N3O4

CAS号

1627494-13-6

稳定性

3 years -20°C powder

2 years -80°C in solvent

91 mg/mL (198.92 mM) warming

Ethanol

35 mg/mL warmed (76.5 mM)

Water

<1 mg/mL

AZD8186是一种有效的选择性 PI3Kβ和 PI3Kδ抑制剂，IC50分别为 4 nM 和 12 nM。Phase 1。

靶点

体外研究

对PI3Kβ抑制敏感的MDA-MB-468细胞和对PI3Kδ抑制敏感的Jeko B细胞中，AZD8186有效抑制p-Akt，IC50分别为3 nM和4 nM。AZD8186在大多数PTEN缺失的细胞系中表现出最高的生长抑制活性，GI50 <1 μM。

体内研究

负荷PTEN-缺失的PC3前列腺肿瘤异种移植物的裸鼠中，AZD8186 (100 mg/kg, p.o.)强烈抑制Akt磷酸化水平，并引起显著的肿瘤生长抑制。与ABT结合使用时，AZD8186 (60 mg/kg, p.o.)完全抑制肿瘤生长。在小鼠PTEN-缺失的 TNBC 模型HCC70和MDA-MB-468，以及前列腺模型HID28中，AZD8186 (50 mg/kg, p.o.)也会抑制肿瘤的生长。AZD8186与化学去势的结合疗法导致持久的肿瘤退化，该作用在治疗停止后依然持续。